Técnicos | |
Altair Mendes dos Santos | Microscopia Eletrônica de Varredura e Inclusão |
Bárbara R. N. Chaves | Contrastação |
Janine Costa Ivo | Microscopia Eletrônica de Varredura |
Marilene Luzia de Oliveira | Microtomia |
Rodrigo Novaes Ferreira | Inclusão |
Thalita Souza Arantes | Contrastação |
Yara Júlia dos Santos Rangel | Microtomia |
FIXAÇÃO SECUNDÁRIA
Estabilização de lipídeos na amostra, previamente fixada com aldeídos, pelo tratamento com tetróxido de ósmio. Adicionalmente, aumenta contraste dos lipídeos para análise por microscopia eletrônica de transmissão e aumenta condutividade de amostras para análise por microscopia eletrônica de varredura.
DESIDRATAÇÃO
Método de substituição gradual da água contida na amostra por álcool ou acetona, para posterior secagem em ponto crítico do CO2 (preparação para MEV) ou infiltração e inclusão em resina (preparação para MET ou MEV).
INCLUSÃO EM RESINA
Embutimento da amostra em bloco de resina, para posterior obtenção de secções ultrafinas.
MICROTOMIA
Cortes semifinos
Obtenção de cortes com espessura entre 200 e 300 nm, de material incluído em resina, para análise por microscopia óptica (correlação com microscopia eletrônica de transmissão) e para orientação sobre a área para obtenção de cortes ultrafinos (para análise por microscopia eletrônica).
Ultramicrotomia
Obtenção de cortes ultrafinos, com espessura entre 50 e 60 nm, de material incluído em resina, para análise em microscópio eletrônico de transmissão.
DEPOSIÇÃO EM TELA
Deposição da amostra sobre tela, para análise em microscópio eletrônico de transmissão.
CONTRASTAÇÃO
Contrastação positiva
Deposição de metais pesados sobre macromoléculas componentes da amostra, tornando-as mais densas à passagem do feixe de elétrons no microscópio eletrônico, e, portanto, mais contrastadas em relação às estruturas adjacentes.
Contrastação negativa
Deposição de partículas (vírus, lipossomas, micelas, etc) sobre tela, seguida do envolvimento das mesmas com metal pesado; de forma que, no microscópio eletrônico de transmissão, apareçam em contraste negativo contra um fundo escuro.
Secagem em ponto crítico do CO2
Método de retirada de todo o líquido de amostras, sem que ocorra deformação da superfície das mesmas em função da tensão superficial. Necessário para análise em microscópio eletrônico de varredura.
MONTAGEM
Montagem de amostra sobre suporte (stub), usando fita adesiva de carbono e tinta condutiva, para análise em microscópio eletrônico de varredura.
FRATURA COM NITROGÊNIO
Congelamento da amostra por imersão em nitrogênio e fratura mecânica da mesma, para análise por microscopia eletrônica de varredura.
METALIZAÇÃO/EVAPORAÇÃO DE CARBONO
Deposição de camada de metal condutivo ou carbono sobre a amostra não condutora, para análise em microscópio eletrônico de varredura.